Ingeniería Genética En Las Rutas De N-Glicosilación Y Secreción En Pichia Pastoris Para La Producción De Enzimas Lisosomales Recombinantes

La terapia de remplazo enzimático (TRE) es una de las principales estrategias para el tratamiento de algunas enfermedades genéticas como los Errores Innatos del Metabolismo (EIM), en las que se encuentra comprometida la actividad biológica de una enzima. En la actualidad, la TRE representa la principal alternativa para el tratamiento de pacientes con enfermedades de depósito lisosomal (EDL). Hasta el momento se han aprobado siete TRE para diferentes EDL, las que han permitido la mejoría de algunas de las manifestaciones somáticas de estas enfermedades. Actualmente, estas enzimas son producidas de forma recombinante en células de mamífero, lo cual tiene un impacto importante en el alto costo de estas terapias. A pesar de que se ha mostrado la posibilidad de producir enzimas activas en Escherichia coli y Pichia pastoris, se ha observado que solamente un apropiado patrón de N-glicosilación permite a la enzima ser direccionada al lisosoma, y que por el contrario, algunas modificaciones realizadas por la levadura P. pastoris pueden llevar a una reacción del sistema inmune, limitando la aplicabilidad de estas enzimas en una eventual TRE. En el caso de la enfermedad de Morquio A, la TRE aprobada recientemente presenta limitaciones tales como efecto limitado en tejido esquelético y cardiaco; una reducida vida media de la enzima en circulación; rechazo inmunológico; y un alto costo. En este sentido es necesario contar con un sistema de expresión que permitan producir enzimas recombinantes que superen uno o varias de estas limitaciones. De esta forma, este proyecto busca realizar modificaciones en las rutas de N-glicosilación y secreción en P. pastoris GS115 empleando como modelo la enzima lisosomal humana N-acetilgalactosamina-6-sulfato sulfatasa (GALNS). Esta cepa modificada podrá ser empleada posteriormente para la producción de proteínas recombinantes portando N-glicosiladas humanizadas.