Frecuencia y fenotipo de subpoblaciones de células B IgM+ circulantes en sangre periférica de donantes sanos con o sin apendicectomía o amigdalectomía

Actualmente el origen, función y repertorio de genes de inmunoglobulinas (Ig) de las células B (cB) de memoria IgM (IgM+IgD+CD27+) circulantes en humanos son controversiales y se considera heterogénea Angel20165849(1)58495849017Angel, J.Heterogeneidad de las células B de memoria IgM humanasRev. Acad. Colomb. Cienc. Ex. Fis. Nat.Rev. Acad. Colomb. Cienc. Ex. Fis. Nat.8-17401548201610.18257/raccefyn.299(1). Nuestros estudios previos a nivel fenotípico y funcional sugieren que está compuesta por lo menos por una población de cB con un repertorio de Ig prediversificado (diversificado por hipermutación generado en ausencia de una respuesta inmune ante un antígeno) con funciones similares a cB innatas (cB similares a las de la zona marginal del bazo (cBZM)) y otra población de cBm con función adaptativa que ingresó a los centros germinales Vasquez20155586(2)55865586017Vasquez, C.Franco, M. A.Angel, J.Instituto de Genetica Humana, Facultad de Medicina, Pontificia Universidad Javeriana, Bogota, Colombia.Rapid Proliferation and Differentiation of a Subset of Circulating IgM Memory B Cells to a CpG/Cytokine Stimulus In VitroPLoS OnePLoS Onee0139718101020151932-6203 (Electronic) 1932-6203 (Linking)26439739http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/26439739http://www.plosone.org/article/fetchObject.action?uri=info:doi/10.1371/journal.pone.0139718&representation=PDF10.1371/journal.pone.0139718(2). Para caracterizar las cB específicas de rotavirus (RV) utilizamos partículas similares a virus (VLP) compuestas de las proteínas VP6/VP2 acopladas a GFP para identificarlas por citometría de flujo Rojas2008376(3)376376017Rojas, O.L.Narváez, C.F.Greenberg, H.B.Angel, J.Franco, M.A.Characterization of rotavirus specific B cells and their relation with serological memoryVirologyVirology234-242380220082008WOS:000260148400009http://www.scopus.com/inward/record.url?eid=2-s2.0-53349162228&partnerID=MN8TOARShttp://ac.els-cdn.com/S0042682208005163/1-s2.0-S0042682208005163-main.pdf?_tid=f80956da-7044-11e4-b4ea-00000aab0f02&acdnat=1416440405_5e6b3d8afdd0df56c432d383745a915d10.1016/j.virol.2008.08.004(3). Encontramos que la mayoría de las cB de memoria (cBm) específicas de RV que circulan en adultos sanos expresan IgM Rojas2008376(3)376376017Rojas, O.L.Narváez, C.F.Greenberg, H.B.Angel, J.Franco, M.A.Characterization of rotavirus specific B cells and their relation with serological memoryVirologyVirology234-242380220082008WOS:000260148400009http://www.scopus.com/inward/record.url?eid=2-s2.0-53349162228&partnerID=MN8TOARShttp://ac.els-cdn.com/S0042682208005163/1-s2.0-S0042682208005163-main.pdf?_tid=f80956da-7044-11e4-b4ea-00000aab0f02&acdnat=1416440405_5e6b3d8afdd0df56c432d383745a915d10.1016/j.virol.2008.08.004(3) y, por lo tanto, estábamos interesados en su papel en la protección. De hecho, cuando se transfirieron adoptivamente cBm CD27+IgM+ humanas purificadas de donantes adultos a ratones inmunodeficientes con el receptor de interlecina-2 NOD/Shi-scid (IL-2Rγ [null]), éstas realizaron el cambio de isotipo a IgG y redujeron la viremia y la antigenemia contra el virus (5) (del cual Diana Marcela Bautista, estudiante de doctorado es autora) en el que comparamos la funcionalidad ex vivo, el fenotipo, el transcriptoma y el repertorio de los genes de Ig de las cB IgM++ e IgM+. Nuestros resultados más importantes fueron: A) En respuesta a un estímulo innato (CpG y un coctel de citocinas), frecuencias más altas de cB IgM++ proliferaron y se diferenciaron hacia las células secretoras de anticuerpos, mientras que las cB IgM+ conmutaron el isotipo hacia la IgG a frecuencias más altas. B) Once marcadores fenotípicos están diferencialmente expresados entre ellas: las cB IgM++ se asemejan a las cBZM del bazo y las cB IgM+ expresan marcadores de cB vírgenes y de cBm. C) Transcriptómicamente, las cB IgM++ expresan genes similares a células que han pasado por el centro germinal y el perfil de expresión génica de las cB IgM+ fue más cercano al de las cB vírgenes. D) El repertorio de genes de Ig de las dos poblaciones mostró diferencias. Estos resultados indican que las cB IgM++ e IgM+ son dos subpoblaciones de cB diferentes: las cB IgM++ tienen características del linaje de cBZM con funciones similares a las células innatas que probablemente entraron a los centros germinales y las cB IgM+ muestran similitudes con las cB vírgenes, pero también tienen propiedades funcionales de las cBm. Este es, a nuestro conocimiento, el primer reporte que propone fenotipos distintos para subpoblaciones funcionales de cB IgM+IgD+CD27+. Puesto que el RV se replica en el intestino y dados los recientes hallazgos que sugieren que las cBMZ intestinales diversifican su repertorio de Ig en el tejido linfoide asociado al intestinto (GALT por su sigla en inglés), para luego viajar, a través de la sangre, al bazo para cumplir su función (5). Una predicción de esta hipótesis es que las cB IgM++ están enriquecidas, con respecto a las IgM+, en aquellas que expresan marcadores de migración intestinal. Con el presente proyecto queremos poner a prueba esta predicción de la hipótesis, que es la continuación lógica del trabajo de doctorado de Diana. Para entender mejor esta hipótesis hay que tener en cuenta los siguientes antecedentes relacionados con los marcadores de migración en cBm: El mecanismo comúnmente aceptado de cómo se genera una respuesta inmune de la mucosa entérica es el siguiente (12) y las frecuencias de cBm circulantes IgD-CD27+α4β7+CCR9+ se correlacionaron con la protección contra la enfermedad, también apoyando el modelo. Es importante anotar que en nuestros estudios previos (18) como en GALT EN.CITE.DATA . Más aún, las cBZM de GALT comparten relaciones clonales con las cB de los centros germinales del GALT y con las cB IgM+IgD+CD27+ circulantes EN.CITE.DATA , sugiriendo que las cBZM obtienen sus mutaciones (diversifican su repertorio) en los centros germinales del GALT y luego migran por la sangre para ir a sembrar la ZM del bazo. Esto también es apoyado por el hallazgo de MadCAM1 (ligando de α4β7) en la ZM del bazo EN.CITE.DATA (7, 14) . Entonces, la expresión de marcadores de migración intestinal en las cB circulantes es una forma de establecer su relación con el intestino. El único estudio que conocemos en el cual se comparó la coexpresión de α4β7 y CCR9 (cB con perfil de migración al intestino delgado) en cB circulantes mostró que, de acuerdo con nuestra hipótesis, las cB IgM+IgD+CD27+ coexpresan estos marcadores a niveles superiores al los de las cB vírgenes y las cB IgG+ y a niveles comparables a los de las cB IgA+ EN.CITE.DATA . No obstante, inesperadamente, las cB solo IgM expresaron mayores niveles de los dos marcadores que las cB IgM+IgD+CD27+. Los autores de este artículo propusieron la hipótesis de que las cB solo IgM son una población que tiene una relación clonal muy importante con las cB IgM del intestino. En el extenso trabajo de las cBZM en humanos se analizaron muestras de apéndices y amígdalas humanas exhibiendo importantes regiones de ZM EN.CITE.DATA , aunque menores que en el bazo. Por lo tanto, otra forma de establecer una relación de las cB circulantes con el intestino es estudiar individuos que carezcan de apéndice. A nuestro conocimiento, no hay evidencia clara de la magnitud del aporte activo de las amígadalas a la circulación de cB IgM+IgD+CD27+. En resumen, nuestros resultados previos sugieren que las cB circulantes IgM++ tienen características de cBZM y por ende es posible que se desarrollen en el intestino y las amígdalas. Con este proyecto queremos determinar si, como predicho por esta hipótesis, las cB IgM++ circulantes tienen incrementados niveles de expresión de los marcadores de migración intestinal α4β7+, CCR9+, GPR15 y CD22 en comparación con la subpoblación de cB IgM+ y si la frecuencia de estas cB en circulación está disminuida en individuos con apendicetomías y/o amigdalotomías.