Diseño de una formulación para el tratamiento de la candidiasis invasiva multidrogoresistente, basada en peptidos de LfcinB libres o nanoencapsulados.

Resumen ejecutivo (354). En este trabajo, pretendemos desde un abordaje multidisciplinar, contribuir en el desarrollo de nuevas estrategias para el control infecciones causadas por levaduras multi-drogo resistentes como Candida auris y otras Candidas. Para el estudio se utilizarán tanto cepas de referencia como cepas clínicas con caracterización del mecanismo de resistencia a fluconazol, equinocandinas, y/o anfotericinaB. En este proyecto en la primera etapa se obtendrán dos librerías de péptidos basados en las secuencias RRWQWR Y RWQWRWQW derivadas de lactoferricina bovina (LfcinB), que han presentado actividad fungicida y fungiestática. Específicamente estas librerías son péptidos análogos en los cuales se cambiará cada residuo de aminoácido por una alanina (Scan de alaninas). Estas librerías serán evaluadas frente a cepas de Candida para seleccionar aquellas moléculas que presenten mayor actividad antifúngica. En la segunda etapa se sintetizarán y evaluarán lipopéptidos análogos a la secuencia de la librería que presentó mayor actividad antifúngica, que contengan diferentes cadenas hidrocarbonadas. En la tercera etapa, los dos péptidos o lipopeptidos más promisorios serán encapsulados físicamente y/o conjugados con nanopartículas biodegradables. En la cuarta etapa se evaluará la citoxicidad selectiva de los péptidos libres y encapsulados, en cultivos de fibroblastos de origen humano. En la última etapa se evaluará la capacidad terapéutica del péptido (o lipopéptido) seleccionado (libre o encapsulado) en candidiasis invasiva en el modelo invertebrado de Galleria mellonellaA partir de estos resultados se propone obtener un prototipo de un nuevo medicamento antifúngico que será caracterizado fisicoquímicamente. Adicionalmente, se estudiará el mecanismo de acción de los péptidos o lipopéptidos en las levaduras, mediante diferentes herramientas como (i) microscopia electrónica de barrido, (ii) evaluación de tipo de muerte celular apoptosis o necrosis, (iii) evaluación de su actividad en biopelículas, y (iv) estudio del sitio diana de acción, mediante curvas de muerte celular de una colección de cepas mutantes de C. albicans y S. cerevisiae, (v) análisis bioinformáticos, predicción de sitios de acción en otras especies de levaduras. Con el desarrollo del proyecto se espera obtener un prototipo caracterizado físicoquímicamente, de por lo menos un péptido libre y/o encapsulado o conjugado con nanopartículas, con actividad fungicida en por lo menos una especie de Candida resistente.Palabras clave: Péptidos antifúngicos, Lactoferricina, Fluconazol, Anfotericina Candida auris, Candida spp resistente, nanocontenedores.