Capacidad de la Membrana Amniótica Humana (MAH) fresca y glicerolizada al 85% para inhibir el crecimiento de microorganismos periodonto patógenos

En la actualidad, el 61,8% de la población Colombiana presenta enfermedad periodontal en diferentes grados de severidad y en promedio el 38,4% de las superficies dentales presentan pérdida del nivel de inserción clinica1, en consecuencia muchas personas estarían en riesgo de perder sus dientes; de ahí la necesidad de ampliar la investigación sobre tejidos que pueden ser utilizados en preservación y regeneración periodontal, para responder a la Política Pública en Salud que incluye el uso de recursos tecnológicos disponibles en el país, con el fin de disminuir la carga de enfermedades no transmisibles como el edentulismo, que en Colombia genera 26,27 años de vida saludable perdidos, una discapacidad que puede evitarse. La MAH es un tejido de fácil obtención por ser parte de un órgano de desecho como la placenta, que ha sido utilizado en muchas aplicaciones médicas y odontológicas en los últimos años, por eso es un tejido que procesan varios bancos de tejidos en el mundo. En Colombia lo procesa el Banco de Tejidos del IDCBIS, utilizando como preservante al Glicerol al 85% mezclado con antibióticos2. En odontología, la MAH se ha usado en cirugía oral como material de revestimiento y como injerto en vestibuloplastias, en tratamientos de defectos de furca, recubrimientos de recesiones gingivales, durante procedimientos que incluyen alisado radicular y cirugía que implican el levantamiento de un colgajo 3¿5.La MAH es un tejido delgado que se encuentra en la parte interna de la placenta, rodeando completamente al embrión y delimitando la cavidad amniótica, que se encuentra llena de líquido amniótico 6,7 y está conformada por el epitelio amniótico, la membrana basal, la capa de fibroblastos y una capa intermedia 8. Es rica en colágeno tipo I, IV, V y VI, proteoglicanos, laminina y fibronectica, que ofrecen características deseables en un tejido que se use como andamio en regeneración, porque el colágeno es bien tolerado y bioabsorbible, tiene propiedades hemostáticas y promueve la migración de tejido conectivo y células epiteliales sobre su superficie, las lamininas exhiben una variedad de actividades biológicas incluyendo la promoción de adhesión celular, crecimiento y diferenciación y la fibronectina está relacionada con muchos procesos celulares incluyendo la reparación de tejidos, coagulación, migración celular y adhesión3. Adicionalmente, se ha reportado que la MAH fresca presenta propiedades antinflamatorias, antibacterianas, antivirales y células pluripotenciales, que promueven la epitelialización 3,6,7,9¿11.Se ha encontrado que la MAH fresca o preservada, funciona igual cuando es injertada, sin embargo, la membrana fresca debe ser usada en un lapso de tiempo corto entre su recolección y el procedimiento clínico, por eso, necesita ser preservada5. Dentro de los métodos de preservación, el más usado en los Bancos de Tejidos es el glicerol al 85 %10,12¿15. La preservación de la MAH con glicerol presenta ventajas dentro de las que se destacan su bajo costo y la simplicidad en su manejo, porque no se requieren equipos ni habilidades especiales para la manipulación del tejido. El glicerol tiene propiedades antibacterianas y antivirales, que dependen de la concentración y la temperatura de almacenamiento inicial y permite la preservación durante periodos de tiempo de hasta 5 años 13, además tiene propiedades antibacterianas y antivirales, extra e intracelulares, por lo tanto, evita la transmisión de enfermedades bacterianas o virales y tiene baja antigenicidad.La MAH, preservada con glicerol es tan efectiva como la membrana fresca en términos de adherencia, alivio del dolor, mantenimiento estructural, disminución de recuentos bacterianos en las heridas y curación, preservación de la estructura morfológica de las células que migran en los injertos de piel13.Cuando la MAH es recolectada se siguen estrictos protocolos para evitar el riesgo de transmisión de enfermedades10,13, por eso desde el momento de su recolección la MAH se somete a protocolos de lavado con solución salina y/o antibióticos y a la inmersión en una solución de almacenamiento que puede ser glicerol con una combinación de antibióticos que inhiban bacterias Gram-negativas, Gram-positivas y hongos. Los antibióticos que se han utilizado incluyen 1.000 U/mL de Penicilina, 20 mg/mL de Estreptomicina y 2.5 µg/mL de Anfotericina B 16,17. Sin embargo, antibióticos como Penicilina, Estreptomicina, Neomicina y Anfotericina B pueden causar daños a la MAH, principalmente sobre las células epiteliales, estos daños incluyen: alteraciones morfológicas, rarefacción, disminución de microvellosidades, degeneración del epitelio, cromatina disuelta, degeneración celular y de organelos como vacuolización mitocondrial; sin alterar el patrón de microfibras de colágeno en el estroma16,18.Considerando el uso clínico de la MAH en regeneración periodontal, y que ésta se injerta en un medio donde cohabitan alrededor de 700 especies de microorganismos, incluyendo bacterias como Porphyromonas gingivalis, Prevotella intermedia y Actynomyces naeslundi i19¿21, es necesario evaluar la capacidad de la MAH de inhibir el crecimiento de estas bacterias, considerando que fresca tiene propiedades antibacterianas asociadas a las células epiteliales por la presencia de ¿¿defensinas en las microvellosidades, que se pierden al ser preservada en glicerol con antibióticos, pero puede mantener su efecto antimicrobiano por el glicerol y por los antibióticos que se usan para su preservación. Dentro de los periodonto-patógenos, se encuentra Porphyromona gingivalis que es un bacilo corto, Gram negativo, anaerobio e inmóvil, asociado con la patogénesis de la enfermedad periodontal16,18,22,23. Sus factores de virulencia incluyen la presencia de una cápsula de naturaleza polisacárida con acción antifagocitaria y adherencia celular, y una membrana externa que facilita la adhesión y coagregación bacteriana (P. gingivalis/ A. actinomycetemcomitans; F. nucleatum A. naeslundii). Su capacidad para colonizar células epiteliales y fibroblastos, le permite formar y mantener una biopelícula subgingival. Además, produce una endotoxina asociada a lipopolisacaridos y enzimas como: colagenasa, queratinasa, hemolisinas, fibrolisinas, hialuronidasa, fosfolipasa, fosfatasa alcalina, fosfatasa ácida y proteasas, implicadas en la destrucción de tejido conectivo del diente y reabsorción ósea; además, por su acción hemolítica, destruye proteínas reguladoras del proceso inflamatorio 22¿24. Prevotella intermedia es un bacilo pleomorfo, Gram negativo, anaerobio estricto, e inmóvil, habita en el surco gingival y en la bolsa periodontal y tiene la capacidad de destruir los tejidos del periodonto y su prevalencia es de aproximadamente ¿ de la población que presenta afección por gingivitis o periodontitis 26. Posee fimbrias y adhesinas que intervienen en la adhesión y coagregación bacteriana. Tiene efectos inmunosupresores porque inhibe la proliferación de linfocitos B y degrada inmunoglobulinas. Produce indol, amonio y ácido propiónico que produce irritación periodontal, además produce fosfolipasas ácidas y alcalinas que promueven la destrucción ósea alveolar. Adicionalmente, presenta epiteliotoxinas que lesionan el epitelio gingival, Factor Inhibidor de Fibroblastos que altera la formación del colágeno y aminopeptidasas que fragmentan las cadenas de colágeno 27,28. Actynomyces naeslundii es una bacteria anaerobia facultativa, Gram positiva, pleomorfa, se observa como bacilos rectos, curvos o cocobacilos con ramificaciones e inmóvil 29,30. Presenta factores de virulencia como fimbrias que determina los fenómenos de adhesión y co-agregación, formando agregados bacterianos que dan como origen acumulaciones y partículas granulosas que dificultan la fagocitosis. Otros factores como la ureasa y neuraminidasa, eliminan el ácido siálico de las glucoproteínas salivares y como resultado exponen receptores, que permiten la unión bacteriana 29.16.La regeneración tisular guiada (RTG) es el tratamiento en los defectos periodontales intraóseos, basada en la repoblación selectiva de células 31 con el uso de membranas bioabsorbibles sintéticas 32. Su predictibilidad puede mejorarse con aloinjertos como la MAH, que al imitar de cerca la membrana basal de la mucosa oral humana, la convierten en una opción para el futuro de la regeneración periodontal 33. La relevancia clínica de la MAH para RTG, al actuar como barrera fisiológica, facilitando la migración celular y mejorando la regeneración general, es justificada por su rica fuente de células madre pluripotentes, proteínas especializadas como fibronectina y colágeno, citoquinas, reducción de las cicatrices posquirúrgicas y una notable actividad de inmunotolerancia, barrera antimicrobiana y bacteriostática 34. Además, por su potencial inductivo óseo por la presencia de células progenitoras mesenquimales, favorece la diferenciación osteogénica y adipogénica, se reabsorbe sin vacíos 35 sumados a la acción de los antibióticos y glicerol residual, pueden convertirla en un injerto muy útil en el manejo quirúrgico de defectos de furca, recesiones gingivales y defectos intraóseos periodontales 36, donde se ha usado la MAH con resultados prometedores, que redundará en el aporte de evidencia que permita usar la MAH preservada en glicerol al 85% en cirugía periodontal para evitar consecuencias como la pérdida dental.Tomando en cuenta que no existen investigaciones que hayan evaluado si la MAH fresca y glicerolizada al 85% es capaz de inhibir el crecimiento de los microorganismos periodontopatógenos como Porphyromonas gingivalis, Prevotella intermedia y Actynomyces naeslundii, el grupo se plantea la siguiente pregunta de investigación: ¿La MAH fresca y glicerolizada al 85% tiene la capacidad de inhibir el crecimiento de los periodontopatógenos Porphyromonas gingivalis, Prevotella intermedia y Actynomyces naeslundii?. Conocer éste papel de MAH, fortalecerá la evidencia científica para